高脂樣本甘油檢測試劑盒適用范圍
描述：甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。與游離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指標，但檢測更加方便。本試劑盒采用優(yōu)化步驟，能夠檢測實體組織、細胞中的甘油含量，線性范圍為10-1200µmol/L。
原理：在ATP存在下甘油被甘油激酶化為3-甘油，再被甘油氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。
適用范圍：測定實體組織、細胞中的甘油濃度。
所需設備：酶標儀、生化分析儀或721、722型可見光分光光度計。佳工作波長550nm，如無此波長建議優(yōu)先選用570nm、次選530、490nm。
一 組織細胞裂解
細胞(包括分化的脂肪細胞)裂解：
消化、離心收集細胞?；蛑苯釉谂囵B(yǎng)皿內(nèi)裂解。通常6孔板單孔約2x106個細胞，75cm2瓶約1x107細胞。按比例每1~2 x 106細胞加0.1ml裂解液，震蕩或渦旋裂解后，靜置10分鐘。
動物組織裂解：
切記要預先將新鮮組織剪切稱重后再進行保存。組織凍存后再進行解凍、剪切、稱重可能會產(chǎn)生嚴重的測量誤差。離心管精確稱重，加入組織塊后再稱重，二者相減(即減量稱重法)計算組織重量(約100mg)。強烈建議按比例每1mg組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質(zhì)含量變異而產(chǎn)生的誤差。（注意；裂解液用量在1ml或更多可保證有效的裂解與脂質(zhì)提?。Ｓ秒妱痈咚賱驖{器或手動玻璃勻漿器破碎組織。（不推薦超聲方法，因其不能*和均勻破碎。應根據(jù)預實驗調(diào)整初始的組織細胞加入量），而后，靜置10分鐘。
裂解液處理：
1. 取適量上清液轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中，進行步驟2的操作。余下的裂解液可用BCA法蛋白定量試劑盒進行蛋白定量或－20oC儲存。
2. 70oC 加熱10分鐘滅活脂肪酶，可能出現(xiàn)絮狀沉淀。
3. 室溫5000rpm離心5分鐘，上層清液即可用于酶學測定。
甘油測定
1. 參見下表加樣。待測樣品體積10µl，多加可能會抑制反應。
2. 37oC或25oC反應 10分鐘。反應平衡后顏色在60分鐘內(nèi)穩(wěn)定。
3. 先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測定各管OD值。
4. 繪制標準曲線并計算甘油濃度。
附Excel作圖步驟：各標準管OD值為y軸，標準品濃度為x軸。(1)鼠標左鍵圈住數(shù)據(jù)，點擊做圖向?qū)?，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R2值-。
說明：
1. 維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試。
2. 紅細胞糖酵解時合成甘油影響測定。
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