檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮如下幾種因素：
1.分析試驗(yàn)應(yīng)用的類(lèi)型： 一般抗體說(shuō)明書(shū)都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種分析類(lèi)型，如：可以應(yīng)用于 WB IHC ICC ELASA 分析等，如果抗體說(shuō)明書(shū)沒(méi)有提及的應(yīng)用類(lèi)型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類(lèi)型，而僅是說(shuō)明尚未經(jīng)過(guò)此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證，如果抗體不適用某些分析試驗(yàn)，則會(huì)在抗體說(shuō)明書(shū)上標(biāo)注出來(lái)不適于某分析試驗(yàn)。
2.樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)： 了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇合適的抗體，至少兩方面因素需要考慮：
（1）待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來(lái)，其中的免疫原包括：全長(zhǎng)蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機(jī)體（如：細(xì)菌）或細(xì)胞，抗體說(shuō)明書(shū)一般都有免疫原的描述，如果打算檢測(cè)的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長(zhǎng)的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用 FACS 流式檢測(cè)活細(xì)胞的表面蛋白，則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來(lái)免疫制備的抗體。（2）樣本的提取或處理過(guò)程：某些抗體要求樣本經(jīng)過(guò)某些特殊處理，例如：許多抗體只識(shí)別還原和變性的、表位已暴露不受二級(jí)四級(jí)結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅識(shí)別天然折疊狀態(tài)的蛋白。當(dāng)選擇免疫組化的抗體時(shí)，應(yīng)注意某些抗體只識(shí)別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則適用于無(wú)需抗原修復(fù)解交聯(lián)步聚的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會(huì)在抗體說(shuō)明書(shū)上應(yīng)用部分標(biāo)示出來(lái)。
3.樣本的物種： 應(yīng)選擇物種相同或有交叉反應(yīng)的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應(yīng)，因其氨基酸序列同源性較高，如果樣本的種類(lèi)未列入抗體說(shuō)明書(shū)上的交叉反應(yīng)種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測(cè)該物種的蛋白，而只是表示該物種尚未用此抗體檢測(cè)驗(yàn)證過(guò)，應(yīng)通過(guò)序列比對(duì)的方法來(lái)預(yù)測(cè)交叉反應(yīng)，可應(yīng)用 Expasy 和 NCBI BLAST 來(lái)進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對(duì)。
鼠或大鼠源的一抗，選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測(cè)分子（酶、熒光素、生物素等）的抗兔 IgG。如果選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對(duì)不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測(cè)方法，則抗體宿主物種的影響不大，如對(duì)不含 IgG 的細(xì)胞裂解物樣本的 westernblotting 檢測(cè)，盡管如此，含有血清的組織裂解物和組織培養(yǎng)上清中含有免疫球蛋白，還原變性樣本中含 IgG，在 western blot 檢測(cè)中則結(jié)合出現(xiàn) IgG 分子 50 and 25 kDa 的重鏈和輕鏈條帶。
根據(jù)一抗種屬及類(lèi)型選擇合適的二抗廣義上是指專(zhuān)門(mén)和進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體，在免疫學(xué)反應(yīng)中，經(jīng)常需要針對(duì)試驗(yàn)選擇不同的二抗，我們能為您的科研工作提供適合和全面的二抗產(chǎn)品。檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時(shí)在后繼試驗(yàn)中也會(huì)有不同的檢測(cè)方案，因此在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類(lèi)型及后繼檢測(cè)方案的要求，一般來(lái)說(shuō)，選擇合適的二抗需要從下面幾個(gè)方面考慮：
【一抗的種屬來(lái)源】 二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來(lái)源，例如：如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體，則相應(yīng)的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據(jù)一抗的物種來(lái)源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。
【一抗的類(lèi)別亞型】 二抗需與一抗的類(lèi)別或亞類(lèi)相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是 IgG 類(lèi)免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗 IgG 抗體。其中單克隆抗體的類(lèi)別及亞類(lèi)通常會(huì)在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中都會(huì)有描述，如果你的一抗是小鼠 IgM，那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠 IgM。如果單克隆一抗是小鼠 IgG 的某一亞類(lèi)（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠 IgG 都可以與之結(jié)合，或者你也可以選擇專(zhuān)門(mén)針對(duì)這一亞類(lèi)的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠 IgG1，那么你可以選擇抗 IgG1 的二抗，此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。在不清楚一抗為何種類(lèi)/亞類(lèi)的情況下，可以選用抗相應(yīng)物種 IgG。
【二抗的種屬來(lái)源】 一般來(lái)說(shuō)，不同的種屬來(lái)源與二抗的質(zhì)量沒(méi)有必然的lian系，來(lái)源于山羊的二抗與來(lái)源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒(méi)有太多的差別。然而在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里，如雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)里，如果其中一個(gè)一抗是山羊來(lái)源的，一個(gè)是小鼠來(lái)源的，則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，這時(shí)候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來(lái)源的。 有相應(yīng)的驢來(lái)源的二抗，非常適合做類(lèi)似雙標(biāo)的免疫實(shí)驗(yàn)。
【二抗的耦聯(lián)標(biāo)記】 一般來(lái)講，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過(guò)氧化酶 HRP 和堿性酶 AP 或其衍生物 APAAP，PAP），熒光基團(tuán)（FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight 等）、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。對(duì)于 Western Blot 和 ELISA，常用的二抗是酶標(biāo)二抗；而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞免疫化學(xué)，組織免疫化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)）中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過(guò)氧化酶或堿性酶標(biāo)記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測(cè)信號(hào)，可以使用 Biotin/Avidin 檢測(cè)系統(tǒng)。在一些熒光檢測(cè)方案中，則需要選擇不同的熒光標(biāo)記；而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。
【是否經(jīng)過(guò)血清吸附過(guò)的二抗】如您的檢測(cè)樣本是人源的蛋白，一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗就需要選擇抗小鼠源的二抗，如果您對(duì)實(shí)驗(yàn)的特異性要求很高，那我們向您推薦經(jīng)過(guò)人血清吸附過(guò)的抗小鼠源的二抗，這種二抗由于經(jīng)過(guò)人血清吸附而排除了與人源組織（如 IgG 等）可能發(fā)生非特異性反應(yīng)的 IgG，因此將非特異性結(jié)合降低到低。
【Anti-IgG 還是 Anti-IgG, F（ab’）2 fragment】 在一些如胸腺、脾臟、血液的組織以及造血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、B 細(xì)胞等細(xì)胞內(nèi)，通常含有較多的 Fc 受體，這時(shí)候選擇二抗時(shí)選擇 Anti-IgG, F（ab’）2 fragment 這樣的特異性二抗，這樣就消除了由于 Fc 部分與 IgG 的非特異性結(jié)合。常規(guī)的 Anti-IgG （H+L）二抗與 IgG 的重鏈和輕鏈都有結(jié)合反應(yīng)，即與 IgG 的 Fc 的 F（ab’）2 片段都能結(jié)合；
由于 IgG、IgM、IgA 都有保守的輕鏈結(jié)構(gòu)域，因此 Anti-IgG （H+L）與它們都有交叉反應(yīng)。而 Anti-IgG, F（ab’）2 fragment 經(jīng)過(guò)了 IgG Fc 片段的吸附，因此只與 IgG 的 F（ab’）2 片段結(jié)合，然而 IgG、IgM、IgA 都有保守的輕鏈結(jié)構(gòu)域，因此與它們也有交叉反應(yīng)。
【Anti-IgG（H+L）、Anti-IgG （gamma）、Anti-IgM （mu）、Anti-IgA （alpha）】 在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里，只需要檢測(cè)樣本里的 IgG 或者 IgM，常規(guī)的 Anti-IgG （H+L）由于與 IgG 的重鏈和輕鏈都有結(jié)合反應(yīng)，而 IgG、IgM、IgA 都有保守的輕鏈結(jié)構(gòu)域，因此不能特異性的檢測(cè)某種類(lèi)型的 IgG 或者 IgM。這時(shí)候就需要針對(duì)特殊類(lèi)型 Ig 分子的二抗。Phygene 備有全面的二抗現(xiàn)貨產(chǎn)品并能提供完整的二抗產(chǎn)品線(xiàn)。按照標(biāo)記分，有 HRP、AP、生物素等標(biāo)記二抗，F(xiàn)ITC、TRITC、Rhodamine、Cy3/5、Dylight 等熒光二抗；按照檢測(cè)物種分，有抗人、大鼠、小鼠、豬、驢、綿羊、山羊、小雞、馬、兔、倉(cāng)鼠、狗、牛，以及多種細(xì)菌類(lèi)二抗；另外，還有 IgG、IgA、IgM以及 IgG（Fc）、IgG（ab’）2 等不同類(lèi)型抗體。
如抗原為 A C 物質(zhì)，產(chǎn)生的抗體為抗-ac， 如抗原為 B C 物質(zhì)，產(chǎn)生的抗體為抗-bc，
AC 物質(zhì)和抗-ac、BC 物質(zhì)和抗-bc 產(chǎn)生的是特異性結(jié)合，而 AC 物質(zhì)和抗-bc、BC 物質(zhì)和抗-ac 就會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng).
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