從植物葉片提取的植物總蛋白不但是家養(yǎng)類動物生長發(fā)育的重要營養(yǎng)物質(zhì)，而且是具有潛力的新一代營養(yǎng)保健食品，因而掌握植物葉蛋白的提取方法至關(guān)重要，讓我們一起了解這整個實(shí)驗(yàn)原理和過程吧。
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
熟悉植物葉蛋白的幾種提取原理和方法，了解其意義及其應(yīng)用價值。
二、實(shí)驗(yàn)原理
植物葉蛋白或稱綠色蛋白濃縮物(leaf protein concentration，簡稱LPC)，是從新鮮植物葉片中提取的高質(zhì)量濃縮蛋白質(zhì)，不僅是畜禽生長發(fā)育和生物試劑畜產(chǎn)品的主要營養(yǎng)物質(zhì)，而且目前也正成為人類的保健營養(yǎng)理想食品之一。天然蛋白存在于為數(shù)甚多的植物體內(nèi)，對其分離應(yīng)依據(jù)人們的利用目的及提取蛋白含量和品質(zhì)加以考慮。
天然蛋白質(zhì)一般在溶液中呈穩(wěn)定的親水膠體狀態(tài)，故LPC 亦稱葉蛋白膠。其特點(diǎn)是：
(1)水化作用 即蛋白質(zhì)分子表面附有能有效防止蛋白質(zhì)分子沉淀析出的水化膜;(2)電荷排斥作用 水化膜外還有電荷層(具陰、陽離子)能有效地防止蛋白質(zhì)分子的凝集。故溶液蛋白質(zhì)顆粒(溶質(zhì))呈溶解狀態(tài);(3)欲提取植物組織中的蛋白質(zhì)必須利用溶解度的差異進(jìn)行分離純化(如鹽析、有機(jī)溶劑分級沉淀法、疏水層析、結(jié)晶、加熱、離心分離等法)，利用分子大小和形狀差異進(jìn)行分離純化(分子篩層析法);還可利用電荷性質(zhì)的差異分離純化(離子交換法)。只要創(chuàng)造上述影響因素，即可使蛋白質(zhì)從植物葉片中分離并沉淀出來。
植物葉蛋白提取一般遵循如下基本原則：盡可能提高樣品蛋白的溶解度，抽提zui大量的總蛋白，減少蛋白質(zhì)的損失;減少對蛋白質(zhì)的人為修飾;破壞蛋白與其他生物大分子的相互作用，并使蛋白質(zhì)處于*變性狀態(tài)。根據(jù)該原則，植物葉蛋白制備過程中一般需要有四種試劑①離液劑：尿素和硫脲等;②表面活性劑：又稱去垢劑，早期常用NP-40、Tritonx-100等非離子型去垢劑，離子型去垢劑有SDS、膽酸鈉、LiDS 等，還有象CHAPS(含它的蛋白溶液可以凍存)與Zwittergent 等雙性離子去垢劑;
③還原劑：DTT、DTE、TBP、Tris-base 等;④蛋白酶抑制劑及核酸酶：EDTA、PMSF、蛋白酶抑制劑混合物(Protease inhibitor cocktails)等，如為了去除緩沖液中存在的痕量重金屬離子，可在其中加入0.1～5mmol/LEDTA，同時使金屬蛋白酶失活。
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